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利用光誘導(dǎo)凝聚體施加毛細(xì)力實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定位,揭示染色質(zhì)的黏彈性異質(zhì)性

來源: 吳其樂 北京生物結(jié)構(gòu)前沿研究中心 瀏覽 224 次 發(fā)布時(shí)間:2024-10-09

生物分子凝聚體是活細(xì)胞中通過液-液相分離和相關(guān)的相變形成的無膜組裝體。在細(xì)胞核內(nèi),染色質(zhì)相關(guān)的凝聚體參與核功能的發(fā)揮,染色質(zhì)相互作用凝聚體的異常與疾病相關(guān)。


染色質(zhì)相關(guān)的凝聚體通過與黏彈性環(huán)境(如細(xì)胞骨架和染色質(zhì))的相互作用影響其形成和功能,但目前沒有統(tǒng)一的模型來描述染色質(zhì)的材料狀態(tài),且缺乏直接測(cè)量力響應(yīng)的技術(shù)。由凝聚體與其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)形成的界面產(chǎn)生的界面張力在細(xì)胞內(nèi)可能發(fā)揮類似分子馬達(dá)的作用1,但目前尚無有效方法在活細(xì)胞中量化和控制這種力,這限制了我們理解基因組組織和功能的能力。


近日,Clifford P.Brangwynne研究組開發(fā)出了VECTOR(ViscoElastic Chromatin Tethering and Organization)系統(tǒng),該系統(tǒng)利用光誘導(dǎo)的凝聚體施加毛細(xì)力,實(shí)現(xiàn)染色質(zhì)位點(diǎn)的快速、精確重新定位,并通過分析模擬揭示染色質(zhì)的黏彈性異質(zhì)性。VECTOR還展示了在高通量重新定位和多種基因組序列操控中的廣泛應(yīng)用潛力。


研究者在U2OS細(xì)胞中使用了雙組份Corelet系統(tǒng)2作為“凝聚體模塊”(創(chuàng)造凝聚體的結(jié)構(gòu)),它由一個(gè)iLID-GFP-Ferritin 24聚體“核心(core)”和一個(gè)帶有SspB標(biāo)記的固有無序區(qū)(IDR)組成。在488nm光照下,iLID與SspB相互作用,在每個(gè)核心上添加多個(gè)IDR,并觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)的相分離。通過將相同的IDR(例如FUSN)與一種結(jié)合特定染色質(zhì)位點(diǎn)的錨定蛋白(結(jié)合重復(fù)端粒TTAGGG序列的TRF1蛋白)作為“黏附模塊”(創(chuàng)造凝聚體與染色質(zhì)位點(diǎn)之間相互作用的結(jié)構(gòu)),來促進(jìn)兩個(gè)模塊之間的相互作用(圖1A和1B)。

圖1.用于快速、精確地重新定位染色體位點(diǎn)的光誘導(dǎo)系統(tǒng)


通過局部藍(lán)光激活,凝聚體可以在標(biāo)記的位點(diǎn)上被誘導(dǎo)形成。在持續(xù)光激活下,錨定到兩個(gè)相鄰染色質(zhì)位點(diǎn)的凝聚體會(huì)生長并融合為一個(gè),并與目標(biāo)位點(diǎn)保持關(guān)聯(lián)。在去激活后,凝聚體收縮產(chǎn)生拉力,導(dǎo)致這些位點(diǎn)重新定位(圖1A)。這種方法能使端粒成功地在多個(gè)微米的核空間內(nèi)重新定位。然而,如果位點(diǎn)之間的距離超過2

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